諾博萊德 植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒 常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5060

產(chǎn)品名稱(chēng)：植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱(chēng)：植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5060 植物膜蛋白/葉綠體蛋白提取試劑盒

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。葉綠體蛋白/膜蛋白提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體蛋白和植物膜蛋白，提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在一小時(shí)內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體蛋白和膜蛋白。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、葉綠體膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以 2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葉綠體是植物細(xì)胞所te有的能量轉(zhuǎn)換細(xì)胞器，光合作用就是在葉綠體中進(jìn)行的,由于具有這一重要功能，所以葉綠體一直是細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)和分子生物學(xué)的重要研究對(duì)象。

葉綠體蛋白/膜蛋白提取試劑盒用簡(jiǎn)便快速的方法可以從各種植物樣本中提取葉綠體蛋白和植物膜蛋白，提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，可在一小時(shí)內(nèi)提取得到高質(zhì)量的葉綠體蛋白和膜蛋白。

本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，包括細(xì)胞質(zhì)膜、葉綠體膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

本試劑盒采用非酶法提取，提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，速度快，可在 1 小時(shí)內(nèi)完成，而且絕少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法較低。酶法提取制備的蛋白，回收率稍有提高，蛋白純度高，保持天然活性，但是耗時(shí)較長(zhǎng)。如果需要更加快捷的提取試劑盒，可以選擇非酶法的提取試劑盒，對(duì)提取速度沒(méi)有要求的話(huà)，可以選擇酶法提取試劑盒。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便。

2. 將蛋白提取的時(shí)間縮短至 1 小時(shí)。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器/渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

二、操作步驟

1. 提取液準(zhǔn)備：

每 500ul 冷的蛋白提取液 C 和 D 中分別加入 1ul 蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

2. 取新鮮植物樣本葉片，用純水或 PBS 洗凈擦干后去除葉梗和粗脈。

3. 用手shu剪刀盡可能剪碎。

每 500mg-1g 新鮮植物葉片樣本中加入 2ml 提取液 A，用勻漿機(jī)充分勻漿或用 Dounce 勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 勻漿盡可能充分。至無(wú)明顯可見(jiàn)固體。

2) 培養(yǎng)細(xì)胞直接收集細(xì)胞后用 Dounce 勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液 A 混勻后直接進(jìn)行以下步驟離心。

3) 處理葉片等組織樣本如果沒(méi)有勻漿機(jī)，也可先加少量提取液 A 后用 Dounce 勻漿器充分勻漿后再加提取液 A 混勻。

4. 將勻漿用 100um 細(xì)胞篩過(guò)濾。

【注】：

1) 沒(méi)有細(xì)胞篩時(shí)可以不過(guò)濾，將勻漿液靜置 1 分鐘，待大的沒(méi)有破碎的組織塊自然沉降，

吸取上清。

2) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將 1ml 吸頭的口剪掉一點(diǎn)再吸。

5. 將濾液 800g 力離心 3 分鐘。將上清（I）移入另一干凈離心管，留沉淀（I）待用。

6. 將上清（I）2000g 力離心 10 分鐘。收集沉淀（II）。將上清（II）吸出加入沉淀（I）

中重懸沉淀（I），留重懸液（A）進(jìn)行步驟 11 待用。

7. 在步驟 7 沉淀（II）中加入 200ul 提取液 B，充分混勻后，在 2-8℃振蕩 20 分鐘。

【注】：

1) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

8. 將提取液在 4℃，12000×g 條件下離心 5 分鐘，取上清，棄沉淀。

9. 即得葉綠體蛋白。

10. 在重懸液（A）中加入 80ul 提取液 C，充分混勻，置 2-8℃振蕩 1-2 小時(shí)。

【注】：

1) 此步驟必須保持低溫條件下振蕩。

2) 用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體有輕微晃動(dòng)即可。

3) 沒(méi)有低溫振蕩條件可以不振蕩，在 2-8℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

11. 在 37℃水浴 10 分鐘。

12. 在 37℃，1000×g 離心 2 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須 37℃條件下離心。

2) 如果離心機(jī)不可控溫，可以不離心，延長(zhǎng)上一步驟水浴時(shí)間，至溶液分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時(shí)間至 1 分鐘。

13. 此時(shí)溶液分為兩層，小心移除上層，保留下層溶液，下層體積大約 50ul 左右。

14. 在下層液體中加入 1-2 倍體積的溶解液 D，充分溶解，即得植物膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 于 4℃靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛘{(diào)整相應(yīng)的濃度后直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以?xún)?yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

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