諾博萊德 植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（低速離心法）

植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(低速離心法)現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號(hào)：P5019

產(chǎn)品名稱：植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（低速離心法）

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（低速離心法）

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder P5019 植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒（低速離心法）

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)存在于除哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞外的各種真核細(xì)胞中。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為由生物膜構(gòu)成的互相通連的片層隙狀或小管狀系統(tǒng)，膜片間的隙狀空間稱為池，通常與細(xì)胞外隙和細(xì)胞漿基質(zhì)之間不直接相通。這種細(xì)胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)一方面構(gòu)成細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)運(yùn)輸?shù)耐?，另方面為?xì)胞內(nèi)各種各樣的酶反應(yīng)提供廣闊的反應(yīng)面積。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的功能與蛋白質(zhì)的合成、糖類和脂類的合成、解毒、同化作用有關(guān)，并且還具有運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)的功能。

傳統(tǒng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取方法需要采用較高的離心力或者采用密度梯度離心，對(duì)實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)設(shè)備要求較高，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作細(xì)致程度要求較高。如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有能達(dá)到 50000×g 以上的離心力的設(shè)備，則沒(méi)法進(jìn)行提取。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(低速離心法)只需要達(dá)到 20000×g 以內(nèi)的離心力即可提取內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白，一般的常規(guī)臺(tái)式離心機(jī)均可以滿足使用要求。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒可用于各種動(dòng)物細(xì)胞和實(shí)體軟、硬組織樣本的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白的提取。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，需要除鹽后再用于 2D 電泳。如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他的蛋白提取試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

適用樣本：植物

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開(kāi)蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開(kāi)蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 使用方便，從細(xì)胞，組織中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)研磨、反復(fù)凍融、超聲破碎等前處理。

2. 提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便，不需要大型離心機(jī)設(shè)備。

3. 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

4. 紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

5. 總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結(jié)合釋出的蛋白防止沉淀。

6. 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含 6種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑 AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括絲an酸蛋白酶、半胱an酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、勻漿機(jī)/勻漿器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開(kāi)蓋。

3. 最好使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒(méi)有Dounce勻漿器，也可用普通玻璃勻漿器勻漿，但是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白回收率會(huì)下降。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

每200μl冷的蛋白提取液C中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 取洗凈擦干后并去除葉梗和粗脈的200-500mg植物組織樣本用手術(shù)jian刀盡可能剪碎，加入1ml提取液A后用勻漿機(jī)充分勻漿或者用勻漿器充分勻漿。

【注】：

1) 勻漿盡可能充分。至無(wú)明顯可見(jiàn)固體。

2) 培養(yǎng)細(xì)胞直接收集細(xì)胞后用勻漿器勻漿即可，勻漿后加提取液A混勻后直接進(jìn)行以下步驟離心。

3) 處理葉片等組織樣本如果沒(méi)有勻漿機(jī)，也可先加少量提取液A后用勻漿器充分勻漿后再

4) 加提取液A混勻。

3. 將勻漿用100μm細(xì)胞篩過(guò)濾。

【注】：

1) 液體量少時(shí)可以加入1-2 ml PBS混勻后再用細(xì)胞篩過(guò)濾。

2) 沒(méi)有細(xì)胞篩時(shí)可以不過(guò)濾，將勻漿液在4℃靜置1分鐘，待大的粗纖維，成團(tuán)組織塊等沒(méi)有破碎的組織塊自然沉降，吸取上清?；蛘咭缘陀?00g力條件下離心1分鐘，收集細(xì)胞上清，棄組織沉淀。

3) 部分黏液較多的植物樣本可能難以吸取，可以將1ml吸頭的口剪掉一點(diǎn)再吸。

4. 將濾液在200×g條件下離心3分鐘，棄沉淀，收集上清。

5. 在500×g條件下離心5分鐘，棄沉淀，收集上清。

6. 在1000×g條件下離心10分鐘，棄沉淀，收集上清。

7. 將上清12000-16000×g離心10分鐘。棄沉淀，留上清。

8. 在上清中加入250μl試劑B，充分混勻。

【注】：

1) 試劑B使用前請(qǐng)充分混勻。

9. 置2-8℃冰箱靜置過(guò)夜。

【注】：

1) 靜置保存時(shí)間不少于10小時(shí)。

10. 10.在4℃條件下，10000×g離心20-45分鐘。

11. 11.小心移除上清，收集沉淀。

【注】：

1) 盡可能吸干上清。

2) 吸取時(shí)小心，防止吸掉沉淀。

12. 在沉淀中加入50-200μl蛋白提取液C，充分混勻。

13. 在4℃條件下振蕩20-30分鐘。

【注】：

1) 使用振蕩器/搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體輕微晃動(dòng)即可。

2) 沒(méi)有振蕩器時(shí)，可以4℃靜置，稍微延長(zhǎng)處理時(shí)間，中間每隔幾分鐘用移液器吹打混勻。

14. 在4℃條件下，12000-16000×g離心10分鐘。收集上清。

15. 即得到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白樣品，置冰箱備用或直接用于下游實(shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

7. 本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

8. 避免皮膚或粘膜與試劑接觸；如果試劑不小心接觸皮膚或眼睛，應(yīng)立即用水沖洗。

植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白提取試劑盒(低速離心法)現(xiàn)貨

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